上海蓝基生物科技有限公司单克隆抗体提纯实验制备流程
1．材料
(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
20mMol/LNaCl
(2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
40mMol/LNaCl
(3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
80mMol/LNaCl
(4)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
(5)饱和硫酸铵液
(6)DEAE—纤维素柱
2．操作方法
（1）小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后，于1.00×105转离心30min，去沉淀。
（2）在4℃于上清中缓缓滴加饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使溶液*终为50%硫酸铵浓度。
（3）此溶液置冰中30min~60min，然后5000r/min离心10min，去上清。
（4）将沉淀溶于Tris－HCl缓冲液（40mMol/LNaCl）中（溶液可能混浊）。
（5）装入透析袋于Tris－HCl缓冲液（20mMol/LNaCl）中透析除盐。
（6）离心去沉淀。
（7）溶液稀释（1:100或更高倍稀释）后，于280nm测蛋白含量，估计蛋白质含量1A280unit=0.8mg蛋白质一般每ml腹水中，含有总蛋白约25mg~36mg。
（8）过DEAE—纤维素柱：纤维素柱高40cm，以20mMol/LNaClTris缓冲液平衡。透析样品以Tris缓冲液等量稀释。
样品进入柱床速度为1ml~2ml/min，以NaCl线形梯度洗脱。大部分单克隆IgG于40mMol/L和80mMol/LNaCl洗脱，也有极少例外的单克隆抗体于120mMol/L~150mMol/LNaCl洗脱。测OD280nm收集蛋白峰，单克隆IgG保存备用。
杂交瘤产生各种**球蛋白，但主要是IgG和IgM，究竟是哪种为主，则决定于抗原的**程序。**一次，且3天后就取脾，多为产生IgM的B**细胞。**多次的多为IgG。
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